PC6-5.2 : 2-AB labeled charged N-glycan analysis by WAX-UPLC

시험소개

당단백질에 결합된 당사슬 구조와 각각의 Charge 별 Glycan profile 및 함량을 분석하는 시험 항목이다. 당사슬 구조에 따른 Sialic acid의 결합 개수에 따라 당사슬 profile 정보를 얻을 수 있다. 분석 방법은 당단백질에서 유리시킨 당을 2-AB 혹은 기타 형광 표지자로 Labeling 후 WAX-UPLC-MS 방법을 이용하여 당사슬 구조 및 함량을 분석 한다.

시험 대상

  • Biosimilar
  • Biobetter
  • Antibody
  • Antibody-drug conjugates
  • Recombinant protein drug
  • Toxin
  • vaccine

시험 방법

  • Glycosidase Digestion
  • Labeling
  • UPLC, ESI-MS
    Characterization of peaks
  • Quantitative analysis

시험결과

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Glycan 구조별 HILIC과 WAX % Area
Sialo-state Glycan structure HILIC(%Area 평균) WAX(%Area 평균) HILIC(%Area 평균) WAX(%Area 평균)
mono 2.90 5.28 4.79 5.28
G3F+1SA 1.89 N.D
Di G2F+2SA 8.05 7.21 21.77 10.59
G3F+2SA 3.46 2.21
G4F+2SA 5.44 0.73
G4F+1LN+2SA 2.09 0.44
G4F+2LN+2SA 2.72 N.D
Tri G3F+3SA 6.02 8.39 28.82 30.18
G4F+3SA 8.95 12.14
G4F+1LN+3SA 7.03 7.64
G4F+2LN+3SA 4.97 2.01
G4F+3LN+3SA 1.84 N.D
Tetra G4F+4SA 15.91 20.09 41.66 53.95
G4F+1LN+4SA 16.58 23.09
G4F+2LN+4SA 7.54 10.77
G4F+3LN+4SA 1.63 N.D